#x98;Die#x9C; Bedeutung des Tyrosinkinase-Rezeptors TrkB bzw. seiner Isoformen in der Pathogenese der idiopatischen pulmonalarteriellen Hypertonie

Abkürzungsverzeichnis 1 Einleitung 1.1 Pulmonale Hypertonie 1.2 Der Tyrosinkinase-Rezeptor TrkB 1.2.1 Die Struktur des TrkB-Rezeptors 1.3 Neurotrophine 1.4 Die Signalübertragung durch Trk-Rezeptoren 1.4.1 Der Ras-MAP-Kinase-Signalweg 1.4.2 Der Akt-PI3-Kinase-Signalweg 1.4.3 Der PLC-γ1-Signalweg 1.5 Die Bedeutung des TrkB-Rezeptors für die Zelle 1.6 Die TrkB-Isoformen 1.7 Die Bedeutung des TrkB-Rezeptors in der Pathogenese der IPAH 1.8 Zielsetzungen und Fragestellungen dieser Arbeit 2 Materialien 2.1 Bakterienstämme 2.2 Eukaryotische Zellen 2.3 Geräte 2.4 Chemikalien und Verbrauchsmaterialien 2.5 Puffer und Lösungen 2.6 Kits 2.7 Primer 3 Methoden 3.1 Zell-Lyse und RNA-Elution 3.2 Reverse Transkription 3.3 Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) und Gel-Elektrophorese 3.4 DNA-Sequenzierung 3.5 Klonierung mit dem pGEM-T Easy Vektor 3.6 Kultivierung elektrokompetenter E. coli-Bakterien 3.6.1 Herstellung von LB-Medium 3.6.2 Herstellung von Ampicillin-Selektionsplatten 3.6.3 Herstellung von Ampicillin-IPTG-X-Gal-Selektionsplatten 3.6.4 Präparation elektrokompetenter E. coli-Bakterien 3.7 Transformation elektrokompetenter E. coli-Bakterien 3.8 Minipräparation 3.9 Restriktionskontrolle 3.10 Klonierung mit dem Expressionsvektor pcDNA3.1(+) 3.11 Maxipräparation 3.12 Kultivierung humaner glatter Muskelzellen aus Pulmonalarterien 3.13 Transfektion von huPASMC 3.14 Real-Time-PCR (RTQ-PCR) 3.15 Proliferationsassay mit Bromodesoxyuridin (BrdU) 3.16 Migrationsassay 3.17 Adhäsionsassay 3.18 Statistische Auswertung 3.18.1 Auswertung der RTQ-PCR 3.18.2 Auswertung des Proliferationsassays 3.18.3 Auswertung des Migrationsassays 3.18.4 Auswertung des Adhäsionsassays 4 Ergebnisse 4.1 Isolierung und Sequenzierung der TrkB-Isoformen 4.2 Endogene Expression der TrkB-Isoformen in huPASMC 4.3 Überexpression der TrkB-Isoformen in huPASMC 4.4 Proliferationsassay 4.5 Migrationsassay 4.6 Adhäsionsassay 4.7 Zusammenfassung 5 Diskussion 5.1 Pathomechanismen der IPAH 5.1.1 Proliferation 5.1.2 Migration 5.1.3 Adhäsion 5.2 Limitationen dieser Studie 5.3 Ausblick und Therapieansätze 6 Zusammenfassung 6.1 Summary 7 Literatur Erklärung Danksagung Lebenslauf