Lignes directrices de l'OCDE pour les essais de produits chimiques, Section 4 Essai n° 442E: Sensibilisation cutanée in vitro Essai de sensibilisation cutanée in vitro portant sur l'événement clé relatif à l'activation des cellules dendritiques dans la vo

Abstract: La présente Ligne directrice porte sur le danger de sensibilisation cutanée pour la santé humaine faisant suite à une exposition avec un produit chimique. La sensibilisation cutanée se réfère à une réponse allergique faisant suite à un contact avec la peau, selon la définition du Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques (SGH) des Nations Unies. La méthode in vitro décrite dans la présente Ligne directrice (LD) pour les essais de produits chimiques (test d'activation de la lignée cellulaire humaine (h-CLAT)) doit aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants cutanés, selon le SGH. La méthode d'essai h-CLAT est proposée pour l'étude du troisième événement clé de l'AOP de la sensibilisation cutanée. Elle permet de quantifier les variations d'expression des marqueurs de surface cellulaires associés au processus d'activation des monocytes et des DC (CD86 et CD54), dans la lignée cellulaire de leucémie monocytaire humaine THP-1, à la suite de l'exposition à des sensibilisants. Le niveau d'expression mesuré pour les marqueurs de surface cellulaires CD86 et CD54 est utilisé pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants cutanés. La variation d'expression des marqueurs de surface est mesurée par cytométrie en flux après coloration cellulaire avec des anticorps marqués par fluorochrome. L'intensité relative de fluorescence des marqueurs de surface, comparée à celle du témoin de solvant/véhicule, est calculée et utilisée dans un modèle prédictif (voir paragraphe 33), pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants La présente LD décrit trois méthodes in vitro portant sur le même événement clé : (i) le test d'activation de la lignée cellulaire humaine (h-CLAT), (ii) le test d'activation de la lignée cellulaire U937 (U-SENS) et (iii) l'essai par gène rapporteur de l'interleukine 8 (essai IL-8 Luc). Ils sont tous utilisés pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants cutanés, selon le SGH. Les méthodes décrites dans la présente LD permettent de quantifier soit les variations d'expression de marqueurs de surface associés au processus d'activation des monocytes et des DC suite à l'exposition à un sensibilisant (CD54 et CD86, par exemple), soit les changements d'expression de l'IL-8, une cytokine associée à l'activation des DC. La présente Ligne directrice (LD) pour les essais de produits chimiques fondée sur les événements clés porte sur le danger de sensibilisation cutanée pour la santé humaine faisant suite à une exposition avec un produit chimique. Elle porte plus particulièrement sur l'activation des cellules dendritiques, qui est un événement clé de la voie toxicologique impliquée dans les effets indésirables (AOP) pour la sensibilisation cutanée. La sensibilisation cutanée se réfère à une réponse allergique faisant suite à un contact avec la peau, selon la définition du Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques (SGH) des Nations Unies. Dans les essais h-CLAT et U-SENS, la variation d'expression des marqueurs de surface est mesurée par cytométrie en flux après coloration cellulaire avec des anticorps marqués par fluorochrome. Dans l'essai IL-8 Luc, la variation d'expression de IL-8 est mesurée de façon indirecte via l'activité du gène de la luciférase qui se trouve sous contrôle du promoteur IL-8. L'intensité relative de fluorescence ou luminescence des cellules traitées, comparée à celle du témoin de solvant/véhicule, est calculée et utilisée dans un modèle prédictif, pour aider à distinguer les sensibilisants des non-sensibilisants