Биотехнология. Часть1. Технология рекомбинантной ДНК

РГПУ им А.И. Герцена, 2011. — 138 с. Учебное пособие (для студентов биологических специальностей педагогических университетов). Материал, представленный в данном учебном пособии, позволит обеспечить студентам биологических специальностей педагогических ВУЗов знакомство с современными методами технологии создания и применения рекомбинантных ДНК для фундаментальных и прикладных целей, а также поможет понять основные молекулярные принципы,на которых базируется биотехнология. Объем и глубина излагаемого в пособии материала определяется учебными курсами по биотехнологии, которые с 2005 года автор пособия читает студентам факультета биологии РГПУ им А.И. Герцена. Введение Ферменты – инструменты генетической инженерии Эндонуклеазы рестрикции Номенклатура Ферментативная активность компонентов системы рестрикции-модификации Липкие концы Тупые концы Классификация эндонуклеаз рестрикции Эндонуклеазы рестрикции типа II Физическое картирование ДНК по участкам узнавания эндонуклеаз рестрикции Фосфомоноэстеразы Полинуклеотидкиназа Лигазы Полимеразы ДНК-полимераза Обратная транскриптаза Терминальная трансфераза, поли-А - полимераза Способы объединения фрагментов ДНК Лигирование по одноименным "липким" концам Лигирование по одноименным "липким" концам с обработкой щелочной фосфатазой Лигирование по "тупым" концам Лигирование фрагментов с разноименными липкими, или липким и тупым концами Генетические векторы для клонирования ДНК Вставки ДНК Векторы для клонирования ДНК Плазмидные векторы Плазмидный вектор pBR322 Введение рекомбинантной ДНК в клетки бактерий и отбор трансформантов Другие плазмидные векторы Векторы на основе бактериофага λ Гибридные векторы Векторные системы для клонирования очень крупных фрагментов ДНК BAC-система YAC-векторы Вспомогательные методы технологии рекомбинантной ДНК Химический синтез ДНК Секвенирование ДНК Молекулярная гибридизация Гибридизация нуклиновых кислот в растворе Гибридизация нуклиновых кислот на твердых подложках Гибридизация на чипах Полимеразная цепная реакция Метод ПЦР ПЦР в реальном времени Обратная транскрипция, сопряженная с полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР) Направленный мутагенез Библиотеки генов Создание геномных библиотек. Скрининг с помощью ДНК-ДНК-гибридизации. Иммунологический скрининг. Скрининг по активности белка Клонирование структурных генов эукариот. Системы экспрессии чужеродных генов Экспрессия генов в клетках прокариот в составе плазмид Экспрессия генов, интегрированных в хромосомную ДНК прокариот Экспрессия рекомбинантных генов в эукариотических системах Экспрессирующие векторы для работы с клетками млекопитающих (ЭВМ) Химерные белки Репортерные гены Другие области применения химерных белков Повышение эффективности секреции Словарь терминов Список используемой литературы